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植物過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒代測(cè)樣本需要注意的

發(fā)布時(shí)間:2017-05-09   點(diǎn)擊次數(shù):2578次

植物標(biāo)本的采集及保存 
1、 稱取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過(guò)夜;
3、 于4度,8000rpm,離心1小時(shí),取上清;
4、 上清液過(guò)C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開(kāi)樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yimi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過(guò)柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈桑4鎮(zhèn)溆茫?/span>
5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)?;靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時(shí)保存于4度待用。

 

6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測(cè)定:(粗提取)
1、 新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心ィ?/span>
2、 加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液),3、 請(qǐng)于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時(shí)保存于4度待用。

 

樣本收集注意事項(xiàng)

1、不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

2、標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無(wú)法涵蓋各種樣本,對(duì)于一些特殊樣本,建議實(shí)驗(yàn)人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn),自行設(shè)計(jì)合理的樣本處理方法。

計(jì)算方法示例:繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。將樣本的OD值為X值代入方程式,所得的Y值即是我們的樣本值。(如上圖所示)

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