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昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒樣品處理及使用怎么做?

發(fā)布時(shí)間:2021-06-17   點(diǎn)擊次數(shù):1270次
  昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
 
  1)血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
 
  2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
 
  3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
 
  4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
 
  5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
  用昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需注意以下事項(xiàng):
 
  1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣
 
  2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
 
  3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 
  4.配液:將30(48t的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48t的20倍)倍稀釋后備用。
 
  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
 
  6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
 
  7.溫育:操作同3。
 
  8.洗滌:操作同5。
 
  9.顯色:每孔先加入顯色劑a50μl,再加入顯色劑b50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
 
  10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
 
  11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(od值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
  昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒操作步驟:
 
  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 
  2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
 
  3、樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
 
  4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 
  5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
 
  7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
 
  結(jié)果判斷
 
  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
 
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