上海仁捷生物人Tau蛋白(Tau)ELISA試劑盒的靈敏度怎么樣?
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人Tau蛋白(Tau)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人Tau蛋白(Tau)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
試劑盒性能
1. 檢測范圍:75 pg/mL – 2400 pg/mL。
2. 靈敏度:檢測濃度小于10 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
實驗結果計算
以所標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
而配對抗體作為核心試劑,是實驗的關鍵因素,是真正意義上的CP。并非所有抗體都能應用于ELISA應用,必須對單個抗體進行評估。首要關注抗體識別的免疫原區(qū)域輔助抗體對的選擇。對于雙抗夾心法CP選擇有竅門,其中一個抗體作為捕獲抗體包被在多孔板表面,固定抗原。另一個則被偶聯(lián),用于抗原的檢測。兩個抗體必須與同一抗原不同表位發(fā)生反應。即如果抗原通過捕獲抗體固定在平板上,那么檢測抗體必須能夠與其他表位相互作用,而不會受到捕獲抗體或平板的位阻。目前市面上也有很多供應商提供驗證過夾心法ELISA的抗體對,可以依據(jù)實際情況選擇。