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人趨化因子C-C-基元受體1(CCR1) 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒原理

發(fā)布時間:2023-12-21   點擊次數(shù):683次

人趨化因子C-C-基元受體1(CCR1) 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人趨化因子C-C-基元受體1(CCR1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人趨化因子C-C-基元受體1(CCR1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。


1.  檢測范圍0.25 ng/mL  8 ng/mL。

2.  靈敏度:檢測濃度小于0.1 ng/mL。

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 

 血清將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測

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