文獻(xiàn)題目 :CAR?T 19 combined with reduced?dose PD?1 blockade therapy
作者單位:天津第一中央醫(yī)院血液科
引用試劑盒:
【RJ11850】人白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒
Although refined chemotherapy, including rituximab (an anti-CD20 monoclonal antibody), and autologous stem cell transplantation have improved the prognosis for B-cell non-Hodgkin lymphoma (B-NHL), patients with refractory B-NHL still have a poor prognosis (1,2). Approximately 19–26% of patients with follicular lymphoma (FL) receiving first-line immunochemotherapy with rituximab, cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisone (R-CHOP) experienced progression of disease within 24 months (2). Chimeric antigen receptor (CAR) T cells are a remedial treatment for these patients. Anti-CD19 CAR T cell (CAR-T 19) therapies have exhibited potent activity against numerous subtypes of B-NHL, including FL (3). Nivolumab, the human immunoglobulin G4 programmed death-1 (PD-1) immune checkpoint inhibitor antibody with high affinity to PD-1 receptors on T cells, could block their interaction with PD ligands 1 and 2 (PD-L1/PD-L2) and restore T-cell function (4). A significant association between the expression levels of PD-1 on T cells and the immunosuppression of T cells has previously been reported (5). A study that focused on the use of Nivolumab in a cohort of 10 patients with relapsed or refractory FL, reported the overall response rate was four patients (40%), and one achieved complete response (6). Meanwhile, PD-1 inhibitors may lead to an imbalance in immune tolerance and uncontrolled immune response, even fatal myocarditis (7). The present study describes a patient with successfully treated refractory FL, who received anti-CD19 CAR-T cells combined with decreased dose PD-1 inhibitor regimen.
雖然精煉化療,包括利妥昔馬布(抗CD20單克隆抗體)和自體干細(xì)胞移植改善了B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的預(yù)后,耐火性B-NHL患者的預(yù)后仍然很差(1,2)。大約19-26%的卵泡淋巴瘤(FL)患者在24個(gè)月內(nèi)(2)內(nèi)接受了一線免疫化療,包括利妥西馬布、環(huán)磷酰胺、多索魯比辛、維西汀和普利尼松(R-CHOP)。奇美抗原受體(CAR)T細(xì)胞是這些患者的補(bǔ)救治療??笴D19 CAR T細(xì)胞(CAR-T 19)療法對(duì)包括FL(3)在內(nèi)的許多B-NHL亞型表現(xiàn)出強(qiáng)大的活性。尼沃魯馬布,人類免疫球蛋白G4編程死亡-1(PD-1)免疫檢查點(diǎn)抑制劑抗體與PD-1受體在T細(xì)胞上具有高度親和力,可以阻止它們與PD配體1和2(PD-L1/PD-L2)的相互作用,并恢復(fù)T細(xì)胞功能(4)。此前有報(bào)道稱,T細(xì)胞PD-1的表達(dá)水平與T細(xì)胞的免疫抑制之間存在顯著關(guān)聯(lián)(5)。一項(xiàng)研究側(cè)重于在10名復(fù)發(fā)或耐火性FL患者中使用Nivolumab,報(bào)告總體反應(yīng)率為4名患者(40%),其中1名患者實(shí)現(xiàn)了*反應(yīng)(6)。同時(shí),PD-1抑制劑可能導(dǎo)致免疫耐受性和不受控制的免疫反應(yīng)失衡,甚至致命的心肌炎(7)。本研究描述了一名成功治療耐火性FL的患者,該患者接受了抗CD19 CAR-T細(xì)胞以及減少劑量的PD-1抑制劑方案。
2017年7月,一名70歲的女病人住進(jìn)天津第一中心醫(yī)院(中國(guó)天津),出現(xiàn)發(fā)燒和腰痛,持續(xù)了10天。進(jìn)行了若干住院實(shí)驗(yàn)室測(cè)試。骨髓活檢顯示淋巴細(xì)胞發(fā)育不良,小細(xì)胞體,略不規(guī)則的細(xì)胞核和較厚的色度。活檢固定為16-18小時(shí),甲醛含量為10%, 它由90毫升蒸餾水和40%甲醛10毫升組成,在室溫下在Richman貼花溶液中孵育18-20小時(shí),由8%鹽酸40毫升和10%甲醛60毫升組成,并嵌入石蠟中。隨后,用以下阻塞試劑切割和孵育了3μm薄的部分:過(guò)氧化物塊(準(zhǔn)備使用;貓。DS9263;萊卡微系統(tǒng)公司)或恩夫西翁 FLEX過(guò)氧化酶阻塞試劑(準(zhǔn)備使用:貓。否。DM821;達(dá)科:安捷倫科技公司),室溫為3-5分鐘。根據(jù)制造商對(duì)以下抗原的協(xié)議,在室溫下使用市售的主要抗體進(jìn)行免疫化學(xué)染色20-30分鐘:CD20(1:100;貓。RTU-CD20-7D1-QH;北京新奧醫(yī)療科技有限公司,CD138(1:100:貓?zhí)?。RTU-CD138-QH;北京鑫奧醫(yī)療科技有限公司,PAX-5(1:100:貓不。PM-0111;上海瑞晶生物技術(shù)有限公司,CD10(1:100:貓?zhí)枺〤RM-0191;上海瑞晶生物技術(shù)有限公司)和 Bcl - 2 (1: 100; 貓。RTU-BCL-2-486-QH;北京鑫奧醫(yī)療科技有限公司)所有抗體都是在奧林巴斯光顯微鏡下觀察到的,×100、×400和1000×放大。在骨髓形態(tài)(圖1A-C)中觀察到異常淋巴細(xì)胞。免疫化學(xué)的結(jié)果顯示,樣本為CD20 +,PAX5+,CD138+,CD10部分陽(yáng)性和BCL2+ 。每100μl緩沖器中約有107個(gè)核細(xì)胞被補(bǔ)充。核細(xì)胞在黑暗中用人類 Fcr 阻塞試劑 (稀釋, 準(zhǔn)備使用; 貓。 130-059-901, 米爾特尼生物tec GmbH) 在黑暗中在 2 –8°C 10 分鐘 沒(méi)有用于骨髓液樣本的固定劑。根據(jù)制造商的協(xié)議,在室溫下使用市售抗體進(jìn)行染色15分鐘:抗Skappa(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?49516;Bd 生物科學(xué)), 反斯拉姆布達(dá) (準(zhǔn)備使用; 貓?zhí)?349516;BD生物科學(xué)),CD19(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?30-113-647;米爾特尼生物特克有限公司),抗CD34(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?48053:Bd 生物科學(xué)), 反 CD10 (準(zhǔn)備使用; 貓。IM3633;貝克曼庫(kù)爾特公司),反CD45(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?47463;BD生物科學(xué)),抗CD20(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?30-113-371:米爾特尼生物特克有限公司),抗CD5(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?51154:BD生物科學(xué)),抗FMC7(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?40919;BD生物科學(xué)),抗CD23(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?41007:BD生物科學(xué))、抗CD71(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?47513、BD生物科學(xué))和抗CD22(準(zhǔn)備使用;貓?zhí)?47573;BD生物科學(xué))。使用貝克曼庫(kù)爾特細(xì)胞伸縮流細(xì)胞儀進(jìn)行流動(dòng)細(xì)胞測(cè)量,使用 CytExpert 軟件(版本 2.3.0.84) 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行評(píng)估:貝克曼庫(kù)爾特公司)。有7.6%的異常單克隆b淋巴細(xì)胞表示CD19+,CD20+,CD22+,F(xiàn)MC7+,CD23−,CD38−,CD71−,CD5−,CD10−,CD11c−通過(guò)骨髓流細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(無(wú)花果。 2).天津中美診斷技術(shù)有限公司在骨髓(圖1D)中分析,IgH/BCL2基因重新排列通過(guò)原位雜交(FISH)熒光檢測(cè)出4.8%。MYD88-L265P基因檢測(cè)呈陰性,由天津中美診斷技術(shù)有限公司直接測(cè)序檢測(cè)為陰性。(圖 1D) 。正電子發(fā)射斷層掃描計(jì)算斷層掃描(PET-CT)檢查顯示,骨密度不均勻,部分骨質(zhì)破壞。此外,PET-CT顯示,骨代謝增加 [L3 椎體局部最大標(biāo)準(zhǔn)化吸收值 (SUVmax), 28.20; 雙邊頸部,右超血管福薩擴(kuò)大淋巴結(jié)SUVmax,8.59]和軟組織質(zhì)量在左間質(zhì)區(qū)域腰椎間2-3盤(pán)水平的新陳代謝增加(SUVmax,8.57:圖3A)?;颊弑辉\斷為晚期IV FL,并治療與利妥昔馬布,環(huán)磷酰胺,多索魯比辛,葡萄干和普利尼索龍(R-CHOP)的組合方案。經(jīng)過(guò)六輪R-CHOP治療后,患者出現(xiàn)全身無(wú)力、腰痛和間歇性腹痛。此時(shí)在骨髓中未觀察到異常表型B淋巴細(xì)胞。PET-CT檢查顯示,骨骼新陳代謝增加,左代謝區(qū)域軟組織質(zhì)量下降:然而,腰椎1-5級(jí)的間質(zhì)淋巴結(jié)密度增加(SUVmax,6.70:圖3B)。PET-CT檢查顯示,中性淋巴結(jié)是新的淋巴瘤病變的最大概率。然而,患者有合并高血壓和糖尿病,因此無(wú)法進(jìn)行進(jìn)一步的活檢,以確認(rèn)這一結(jié)果。此外,CD3+ T 細(xì)胞中 PD-1 的高表達(dá) (80.76%)通過(guò)流動(dòng)細(xì)胞學(xué)從患者的外周血液樣本中檢測(cè)到。