葡萄糖-6-磷酸酶測(cè)試盒操作步驟
產(chǎn)品說(shuō)明: 葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)是一種水解磷酸化合物的磷酸酶,廣泛存在 于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中,是糖異生過(guò)程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無(wú)機(jī)磷,利用鉬藍(lán)法測(cè)定無(wú)機(jī)磷含量的增加,即可反映G6P活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液qiang、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸 餾水。
樣本處理
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取 液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴, 功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液), 進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。