昆蟲elisa檢測試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中昆蟲保幼激素(JH)的水平。向預(yù)先包被了昆蟲保幼激素(JH)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入保幼激素(JH),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗保幼激素(JH)抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中昆蟲保幼激素(JH)的濃度呈正相關(guān)。
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放,時間做相應(yīng)溫度調(diào)整,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,(由于樣本種類過多,每個單位處理方式不一樣,本說明書不做詳細(xì)介紹)。
昆蟲elisa檢測試劑盒的操作流程:
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。
3、樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。
6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。